久久久亚洲一区二区三区,年轻漂亮的后玛,一女三男做2爱a片免费,波多野结衣在线播放

免費咨詢熱線:
技術文章
首頁 > 技術中心 > 蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么?

蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么?

 更新時間:2023-09-22 點擊量:933

在進行任何一種蛋白質純化的時候,都要時刻注意維護它的穩(wěn)定性,保護它的活性,那么你知道蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、注意事項:

1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫內進行。

2、濃度不要太稀,蛋白濃度維持在μg/mL~mg/mL。

3、選擇合適的pH,除非是進行聚焦層析,所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同,防止蛋白質的沉淀。

4、使用蛋白酶抑制劑,防止蛋白酶對目標蛋白的降解;在純化細胞中的蛋白質時,加入DNA酶,降解DNA,防止DNA對蛋白的污染。

5、避免樣品反復凍融和劇烈攪動,以防蛋白質的變性。

6、緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環(huán)境。

7、在緩沖溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇),防止蛋白質的氧化。

8、加1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑,防止重金屬對目標蛋白的破壞。

9、使用滅菌溶液,防止微生物生長。

二、常見問題:

1、通過 His 標簽純化的蛋白,雜帶比較多,如何改進?

(1)如果純化的是上清,蛋白酶會部分降解目的蛋白,可通過加多種蛋白酶抑制劑改進。

(2)可提高雜蛋白與鎳柱結合起始咪唑濃度,以降低雜蛋白與鎳柱的親和力。

(3)雜蛋白和目的蛋白結合,可通過超聲前加入去垢劑的方式消除(1%-2%Tritonx-100)。

2、鎳柱使用中出現棕色的原因

(1)柱子發(fā)生堵塞,可能是樣品中細胞碎片或其他雜顆粒所致,所以樣品一定要高速離心,并過0.22或者0.45的膜。

(2)上清純化時,蛋白發(fā)生變性,有絮狀物產生,趕緊加入 1-2mM DTT (上清樣品處理要在冰浴中進行),還不行加尿素變性,使其在變形環(huán)境下。

(3)樣品處理時的料液比不要太小,否則黏度大,或者導致蛋白析出或變性,料液比要在 1/10-1/15 之間較適宜。

3、純化過程中蛋白出現了渾濁應如何處理?

(1)出現渾濁,說明蛋白處在不穩(wěn)定的環(huán)境中或者自身就不穩(wěn)定,所以要檢查緩沖體系是否正確,環(huán)境是否低溫,或在緩沖液中加入還原劑 DTT。

(2)加入肌氨酸鈉,迅速使蛋白變性,消除渾濁現象。

更多有關蛋白質提純的注意事項和常見問題,請聯系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:


岳今晚让我玩个够肥水一体探岳体| 欧美日韩精品一区二区在线播放| 国产亚洲精品久久久久久久软件| 性生片30分钟| 亚洲综合小说另类图片动图| 精产国品一二三产品区别图片| 国产全肉乱妇杂乱视频| 人妻夜夜爽天天爽| 国产艳妇av在线观看果冻传媒| 亚洲日韩一区精品射精| 偷窥学校女厕撒尿bbbbb| 人人妻人人澡人人爽人人dvd| 日本添下边无码视频| 日韩欧美亚洲国产精品字幕久久久| 麻豆md0077饥渴少妇| 成年免费视频黄网站在线观看| 久久桃花综合桃花七七网| 成人毛片18女人毛片免费| 护士奶头又白又大又好摸视频| 一个人看的高清视频| 成人做爰高潮a片免费视频| 精品2022露脸国产偷人在视频 | 免费真人视频网站| 发电俏娇娃在线观看| 青青精品视频国产| 翁吻乳婷婷小玲21章小说| 金瓶梅在线播放| 军人全身脱精光自慰| 国产精品沙发午睡系列99| 被仇人调教成禁脔h虐| 小少妇bbbbbbbbbbbb| 野花香视频在线观看免费| 国产成人一区二区三区传媒| 香港a片| 好吊视频一区二区三区| 日本极品人妻videossex| 男人桶女人30分钟| 99精品人妻无码专区在线视频| 亚洲精品国产精华液| 第一次进入女朋友的身体注意事项 | 男女动态图|