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細(xì)胞鋪板不勻的解決方法有哪些?

 更新時(shí)間:2024-02-19 點(diǎn)擊量:827

細(xì)胞接種鋪板作為體外藥理實(shí)驗(yàn)中最基本的技能,是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素。鋪板不勻又是科研實(shí)驗(yàn)中通往成功道路的一大障礙,細(xì)胞聚集導(dǎo)致的接觸抑制現(xiàn)象使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可信度大打折扣。本片文章將會(huì)介紹細(xì)胞鋪板不勻的解決方法有哪些?一起來(lái)跟小編漲知識(shí)吧!

對(duì)于96孔板,每孔通常加入100μL細(xì)胞懸液。加樣方式為傾斜槍頭,從孔的左邊靠近底部緩慢加入(加樣過(guò)快同樣容易導(dǎo)致細(xì)胞聚集)。筆者建議,每加完半拉板子時(shí),把細(xì)胞重新混勻,繼續(xù)加樣。加樣結(jié)束后,鏡下觀察如有局部不均勻現(xiàn)象,可以采取敲擊法,具體操作如下:將板子置于臺(tái)面上,左手持住板子的左邊,右手輕輕敲擊板子的右邊緣(5-8次),力度太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)反而更易導(dǎo)致細(xì)胞聚集。將板子順時(shí)針旋轉(zhuǎn),依次敲擊剩余三個(gè)邊(據(jù)說(shuō)逆時(shí)針效果不好),靜置約5-10分鐘后,放入37℃培養(yǎng)箱。

對(duì)于6孔板、12孔板或24孔板,為防止表面張力導(dǎo)致的中間液面太低細(xì)胞聚集的現(xiàn)象。通常每孔首先滴加少量培基,輕輕晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底以保證板子的孔底都是濕潤(rùn)的,這樣加液后細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,可以避免加在中間位置和加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞局部太多的現(xiàn)象,細(xì)胞分散會(huì)較均勻。注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下(5-10分鐘)。鏡下觀察細(xì)胞均勻度,如不均勻可采用以下8字法、十字法及震蕩法等方法進(jìn)行細(xì)胞均勻度處理。具體操作如下:

 方法一(8字法):這種方法也是大家最常見(jiàn)的細(xì)胞搖勻方法。橫向8字搖勻法參考下圖,搖動(dòng)次數(shù)根據(jù)鏡下觀察和個(gè)人力度具體分析(參考:保證液體不被晃動(dòng)出去,8字晃動(dòng)5次理論上就可以基本晃勻)。搖勻結(jié)束,切忌在鏡下移動(dòng)觀察視野太久,以免伴隨著輕微的移動(dòng),細(xì)胞又往中間聚集。

方法二(十字法): 細(xì)胞鋪完板后,在水平方向上,上下左右四個(gè)方向進(jìn)行移動(dòng),呈十字形狀,重復(fù)5-6次。有些同學(xué)覺(jué)得十字法搖勻效果并不好,方法關(guān)鍵的是搖完后最好直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過(guò)多的移動(dòng)(也有同學(xué)建議可以在培養(yǎng)箱中搖勻)。另外,同樣不建議放到鏡下長(zhǎng)時(shí)間去觀察。

方法三(十字類似法):細(xì)胞鋪完板后,放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),每個(gè)方向5-6次。其他具體操作同十字法。

方法四(震蕩法):細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,對(duì)著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之分散。如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,我建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,效果不錯(cuò),就是振幅小,頻率高的那種。(個(gè)人不太推薦這種方法,板子接觸振蕩器后增加了染菌的風(fēng)險(xiǎn),而且轉(zhuǎn)速的調(diào)節(jié)和時(shí)間的掌握比較困難)。
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